免疫磁珠试剂盒（免疫磁珠试剂盒说明书）

　　判定CD133+-HepG2肝癌细胞的干细胞特性，然后通过131I标记CD133单克隆抗体，研究其在人HepG2肝癌裸鼠模子体内生物分布及其在体内肿瘤中的放射免疫靶向性。第一部分CD133+-HepG2细胞的分选及其干细胞特性的判定实行方法：免疫磁珠法分选人肝癌CD133+-HepG2细胞，FCM法检测分选前后CD133表达率，对分选得到的CD133+-HepG2肝癌细胞举行体外成球、克隆形成以及BALB/c小鼠体内成瘤实行以鉴定其干细胞特性，并取CD133+-HepG2细胞皮下移植瘤构造举行HE染色，观察肿瘤构造布局。实行结果：利用免疫磁珠法乐成的得到CD133+-HepG2及CD133--HepG2细胞，FCM检测HepG2细胞分选前后CD133表达率分别为（3.69±1.52）%和（93.58±3.74）%；CD133+和CD133-细胞无血清作育观察体外成球本领，结果表现随着时间的延伸，CD133+细胞抱团生长，且球体数量增多、体积增大，而CD133-细胞则不能，且细胞形态出现非常，细胞渐渐裂解。而在克隆形成实行中，雷同条件下CD133+细胞的克隆集落数显着高于CD133－细胞，二者差别有统计学意义（P0.01)，别的显微镜下观察CD133+细胞形成的克隆球对比CD133-细胞形成的克隆球显着较大。体内实行结果表现，1×103个CD133+细胞组于5周内有一只BALB/c小鼠体内形成皮下移植瘤，5×103个CD133+细胞组中有2只形成皮下移植瘤，1×104个CD133+细胞组中四只均能形成皮下移植瘤，而雷同条件下1×104CD133-细胞也不能成瘤，HE染色表现由CD133+细胞形成的皮下移植瘤在显微镜下构造细胞分列精密，细胞核清楚可见。实行结论：上述实行结果表现免疫磁珠分选得到的CD133+-HepG2细胞对比CD133--HepG2细胞具有更强的体外成球、克隆形成以及体内成瘤本领，是具有肿瘤干细胞特性的肝癌细胞亚群。第二部分131I标记CD133单克隆抗体在体内的放射免疫靶向研究实行方法：采取氯胺T法标记131I和CD133单克隆抗体（131I-CD133抗体），纸层析法测定标记物的标记率、放化纯度和其在人血清中的稳固性，以及采取细胞连合实行测定其免疫活性；创建HepG2肝癌裸鼠模子，将创建好的肝癌裸鼠模子随机分为四个时间（2,12,24和48h），每个时间组5只，将每只肝癌裸鼠尾静脉注射131I-CD133抗体约7.4MBq，盘算各时间组各构造器官每克构造百分注射剂量率(％ID／g)；采取同型单克隆抗体IgG作为对照，方法雷同，比力两种标记物在HepG2肝癌裸鼠模子中24h时各构造生物分布及肿瘤/非肿瘤构造（T/NT）比值。实行结果：纸层析法测得131I-CD133抗体的标记率为（86.95±1.16）%,放化纯度为98.07%；与血清孵育48h后，131I-CD133抗体的放化纯度仍为（89.63±0.64）%；131I-CD133抗体与CD133＋细胞的连合率随着细胞浓度的递增而增长，最大连合率为（69.3±0.69）%，CD133－细胞作为对照与标记物的连合本领显着低于CD133＋细胞（P＜0.01)。131I-CD133抗体在HepG2肝癌裸鼠模子中2、12、24和48h肿瘤构造的%ID/g分别为（2.52±0.13）%、（1.09±0.08）%、（0.80±0.10）%、（0.60±0.10）%,与对照组131I-IgG在24h时的肿瘤放射性摄取及各构造T/NT对比，131I-CD133抗体组显着高于对照组131I-IgG，差别有统计学意义（P0.05)；实行结论：本实行乐成的制备了具有较好稳固性和免疫活性的131I-CD133抗体，其对比对照组131I-IgG在HepG2肝癌裸鼠模子中能更有效的浓聚于肿瘤，可以或许反应CD133表达环境，为体内靶向CD133+肿瘤干细胞治疗及显像提供了实行底子，CD133将有大概成为LCSCs及肝癌治疗的有效靶点。这些结果表现靶向CSCs的治疗可以通过放射性核素标记CSCs外貌标记物的方法来实现。